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在台面上,
移
枪的
钮。
枪尖
准悬停在无
相的中央,缓缓
取了400微升的
,移
一个全新的无酶离心
中。
全程,江河的手没有一丝颤抖。
外科医生的定力,在这一刻展现得淋漓尽致。
陆晓林在旁边看得
发麻。
——哪怕是浸
实验室多年的老研究员,悬空
取
相时也难免会有细微的晃动,但江河的手就像是被焊死了一样,稳得可怕。
“加
等
积的异丙醇,陈浩,递冰盒。”
样本在冰上静置了10分钟后,再次放
冷冻离心机。
12000转,10分钟。
再次取
时,
底
现了一
半透明胶状沉淀。
“rna沉淀
来了。”程溪瑶隔着护目镜,
睛亮了起来。
江河:“弃上清,加1毫升75的冰乙醇洗涤沉淀。”
轻轻悬浮沉淀后,第三次离心。
7500转,5分钟。
最后,用移
枪极其小心地
走所有的乙醇
,将离心
敞
放置在超净台的通风
。
“风
5分钟,不能
透,否则很难溶解。”
五分钟后,江河加
20微升rnase-free的
,轻轻
打。
“去测
度。”江河把样本递给陆晓林。
陆晓林拿着样本走到nanodrop分光光度计前,取了一微升滴在检测基座上,放
悬臂。
电脑屏幕上立刻
一条曲线。
“
度120 ng/μl,a260/280比值202。”陆晓林声音迅速,“师弟,提取极其完
!纯度极
,没有
白和苯酚污染!”
陈浩几个人
地松了一
气,互相对视了一
。
到了!
江河毫不犹豫,
:“立刻
行逆转录,rna极易降解,必须
上把它变成稳定的cdna。”
“引
用什么?”陆晓林问。
“用随机六聚
引
(rando hexars)
全转录本的逆转录。”
江河走到冰箱前,拿
逆转录试剂盒:“不需要特异
引
,我们在pcr阶段再用甲
通用的ha(血凝素)和na(神经氨酸酶)保守区引
去钓
目标片段。”
看着手里的试剂,江河
神微动。
其实,如果这真的是一
完全未知的全新病毒,今晚的这几个小时
本连门槛都摸不到。
光是引
设计就能卡死全中国最
尖的实验室两周时间。
但他不一样。
他记得h1n1的基因图谱,也知
它的外
白弱
,包括它最容易被哪
引
扩增。
基本就等同于,拿着标准答案,反向推导解题步骤。
所以效率才能这么
。
逆转录反应
系
制完毕。
放
pcr仪。
42c孵育60分钟,70c加
5分钟灭活逆转录酶。
凌晨5:30。
逆转录完成。
极其脆弱的rna终于变成了相对稳定的dna。
“准备pcr扩增反应。”
“我们要分别扩增它的ha基因、na基因、基因以及pb1基因片段。”
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